El jurado está integrado por:

Dra. Edda C. Villaamil Lepori (Cátedra de Toxicología y Química Legal. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires)

Dr. Luis A. Ferrari (Cátedra de Toxicología y Química Forense. Facultad de Ciencias Exactas. Universidad de Morón)

Dra. María I. Díaz Gómez (Instituto de Investigación e Ingeniería Ambiental, UNSAM)

Lugar: Instituto de Investigaciones Científicas y Técnicas para la Defensa (CITEDEF), Salón auditorio del Edificio Torre

Resumen:

Se estima que unas quince millones de personas están infectadas con Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en América Latina y que entre 75 y 90 millones están expuestas a la infección.

El parásito causante de la enfermedad, el T. cruzi, utiliza la maquinaria celular para producir cientos de nuevos parásitos antes de que la célula colapse y pueda infectar el tejido circundante. Esto significa que las drogas contra esta enfermedad necesitan ser capaces de cruzar la membrana plasmática para poder matarlo. El Nifurtimox (Nfx) y el Benznidazol (Bz) son los dos fármacos disponibles para tratar la infección del T. cruzi y que reducen efectivamente la enfermedad de Chagas aguda. Su efectividad es mejor para las formas infectadas extracelulares del T. cruzi presentes en la fase aguda que para las formas intracelulares que causan la enfermedad crónica. Ambas drogas deben ser utilizadas durante períodos prolongados y pueden causar efectos adversos severos. El tratamiento de pacientes en la fase aguda de la enfermedad con Bz o Nfx es capaz de prevenir la muerte y posee una alta tasa de cura.

El objetivo general de la presente tesis doctoral fue aplicar el conocimiento toxicológico para establecer biomarcadores asociados con el uso de los dos fármacos para el tratamiento de las fases aguda, intermedia y crónica de la enfermedad, con el propósito de poder visualizar potenciales acciones tóxicas. Los objetivos específicos fueron: 1) establecer metodologías para cuantificar por técnicas de HPLC-UV y por espectrometría UV/visible los contenidos del Nfx y Bz en sangre (hoy no disponibles en la química clínica); 2) verificar si la administración de Nfx y Bz aumenta significativamente la formación de productos indicadores de estrés oxidativo tales como hidroperóxidos; 3) analizar los resultados obtenidos con el propósito de poder visualizar potenciales acciones tóxicas.

Como resultado principal, se lograron establecer metodologías para cuantificar por técnicas de HPLC-UV y por espectrofotometría UV-Visible los contenidos en sangre del Nfx y Bz. Cada técnica validada resultó ser lineal, robusta y precisa en un amplio rango de concentración para ambas drogas. Se realizaron ensayos de biomonitoreo de exposición y de efectos. En particular se realizó el biomonitoreo en sangre luego de la administración de cada antichagásico.

Adicionalmente, para el Bz se realizó el biomonitoreo en sangre utilizando ratas de diferentes edades y los resultados avalan el empleo de Nfx o Bz con baja toxicidad y máxima efectividad contra el T. cruzi  tempranamente en recién nacidos, cuando los sistemas enzimáticos que los metabolizan aún no completaron su desarrollo en los microsomas hepáticos. Esto actualmente se hace así y se refleja en los niveles de ambos antichagásicos encontrados en sangre.

En cuanto a los biomarcadores de efecto, se realizó la determinación de quimioluminiscencia inducida por t-butilhidroperóxido y la determinación, mediante la técnica del naranja de xilenol, de hidroperóxidos de lípidos en plasma de ratas tratadas con los fármacos. En el primer caso se encontró que en los animales tratados con Nfx la respuesta fue significativamente mayor a la hora de su administración, mientras que en el caso del Bz se observó una diferencia significativa a las tres horas. El ensayo para medir hidroperóxidos en ratas tratadas con Nfx o Bz mostró una mayor respuesta a  1, 3 y 6 horas para el Nfx y a 1 hora para Bz, después del tratamiento.

Las metodologías aquí desarrolladas para  cuantificar Nfx y Bz en sangre así como  los biomarcadores  de presencia y de efectos perjudiciales del Nfx y Bz son accesibles en la clínica y podrían utilizarse en estudios futuros para detectar precozmente sus consecuencias tóxicas y para desarrollar coadyuvantes útiles que prevengan los efectos secundarios tóxicos de ambos antichagásicos.